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Southern/Nothern印迹杂交

Southern和Nothern印迹杂交是进行基因组DNA或者RNA特定序列的通用方法,对实验技术的要求非常高,发高的SCI文章经常要用到的检测方法,是金标准。

Southern/Nothern印迹杂交介绍

Southern 印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后,通过琼脂糖凝胶电泳进行分离,继而将其变性并按其 在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上,固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列,则 二者通过碱基互补的原理进行结合,游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测,从而显示出待检的片段及其相对大小。

Nothern Blot是DNA/RNA的杂交,它是一项用于检测特异性RNA的技术。RNA混合物首先按照它们的大小和相对分子量通过变性琼脂糖凝胶电泳加以分离,凝胶分离后的RNA通过印迹转移到尼龙膜或硝酸纤维素膜上,再与标记的探针进行杂交反应,通过杂交结果分析可以对转录表达进行定量或定性。它是研究基因表达的有效手段。与Southern blot相比,它的条件更严格些,特别是RNA容易降解,前期制备和转膜要防止Rnase的污染。

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