RNA PCR ARRAY介绍

简介:

RT²Profiler PCR芯片是研究一组特异性基因表达水平的理想方法。基于SYBR green 的实时定量PCR方法，同时将微列阵技术与特定生物学通路（specific biological pathways）的研究有机结合, 可以大大缩短发现诊治各种疾病的生物学标志物(biomarkers)的时间适用面广，简单方便，使PCR芯片具有广泛的应用前景。由于每种芯片都是根据特别的信号通路或者特定的应用范围设计的，研究者可以用它来研究自己感兴趣的一组基因，一个生物学通路或者某种疾病状态。PCR芯片所研究的基因范围相对集中，大大节省了在数据分析方面所花费的时间，相对更简洁针对性更强的信息也有利于接下来的更深入更准确的研究。因此，研究者使用PCR芯片，可以在更短的时间内得到更丰富的信息。芯片包括预设计的通路特异性PCR芯片或者客户订制PCR芯片。PCR芯片具有与实时定量PCR相当的灵敏度，特异性和重复性。PCR芯片的设计思路，使实验设计和实际完成实验的时间大大缩短，对结果的分析也更直接有效。使用PCR芯片，每张芯片使用的总RNA样品量最少可低至25ng，最多则可达到5.0ug。PCR芯片的特异性保证扩增产物的唯一性和基因特异性。因此，检测得到的基因表达水平差异真实的反映了所要研究的基因的情况，是研究者开展研究的得力工具。

PCR芯片的设计和所包含的基因：

96孔模式的每种RT2Profiler PCR芯片，含有基因特异性引物，可用于研究84个与某种信号通路或者疾病相关的基因。此外，芯片中还有设置了3个检测实验质量的对照。

图1 PCR芯片示意图

• A1-G12孔包含了同一信号通路或者疾病的84个相关基因的引物（gene 1- gene 84）。
• H1-H5孔包含了5个看家基因（HK1-HK5），用于芯片数据的标准化。
• H6为基因组DNA参照（GDC），其中固定的引物能特异性的检测非转录的基因组DNA重复片段，从而检测样品中是否存在DNA污染。
• H7到H9是三个重复的孔，均为反转录参照（RTC），用于检测RT反应的效率。
• H10到H12是阳性PCR参照（PPC），反映了PCR反应的效率。这些孔中加入了人工合成的DNA序列和相应的引物对。两组重复的对照RTC和PPC也可以用于检测芯片间和芯片内的一致性。